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去垢劑
圖片來自潔淨環保空間

去垢劑亦有稱為清潔劑,主要成分是表面活性劑(部分場合即特指表面活性劑,[1]可分陰離子、陽離子和中性去垢劑等多種類型,中性去垢劑在蛋白提取中應用的較多),根據實際需求有時也會包括研磨劑,pH調節劑,酸,硬水軟化劑,氧化劑發泡劑增白劑、稀釋劑等多種成分。

幾種常見清潔劑

鉻酸洗液:由重鉻酸鉀和濃硫酸配置,具有氧化性和酸性,用於清洗化學儀器上的污點。[2]

表面活性劑:通常由一個極性頭和一個非極性尾組成,用於去除難溶於水的污漬 漂白劑:通常含次氯酸鹽成分,原理為其氧化性

稀鹽酸:用於去除鹼性的污漬,如馬桶中的結塊

碳酸鈉溶液:用於去除油漬,其原理為酯在鹼溶液中水解,參見皂化反應

去垢劑(表面活性劑)種類

A.中性去垢劑 又稱非離子表面活性劑,對蛋白質的變性作用影響較少,宜於蛋白質或酶提取之用。一般市售中性去垢劑有聚乙二醇類,如PEG200;多元醇類表面活性劑,如山梨醇、司盤類和吐溫類;聚氧乙烯脂肪醇醚,如苄澤類、平平加類;聚氧乙烯烷基苯酚醚,如Igepal CO、乳化劑OP、Triton、Pluronic(用作消泡劑、潤濕劑、增溶劑)、泡敵。中性去垢劑作用後可通過Sephadex LH-50柱除去;也可直接上DEAE-Sephadex柱層析分離目的蛋白,不必先除去去垢劑。

B.陰離子去垢劑 常見的有十二烷基硫酸鈉和十二烷基璜酸鈉。前者可促進核蛋白的溶解,將核酸釋放出來,並對核酸酶有一定抑制作用,常用於核酸的提取。 C.陽離子去垢劑 如潔爾滅、新潔爾滅、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒淨(TMPB)、杜滅芬等,消毒滅菌類居多。

D.天然表面活性劑 又稱為生物表面活性劑,包括種類較為廣泛,如各種樹膠(阿拉伯膠、杏膠、桃膠、果膠)、明膠、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、瓊脂、海藻酸鈉、酪蛋白、膽甾醇、膽酸類、多糖類(如環糊精)等。

E.兩性表面活性劑 在鹼性水溶液中呈陰離子表面活性劑的性質,起泡性好,去污力也強;在酸性溶液中則呈現陽離子表面活性劑特徵,其殺菌性很強。

在蛋白提取中的應用

蛋白質變性劑的作用是破壞蛋白質的次級鍵,如氫鍵、鹽鍵和疏水力,引起天然構象的解體;它們並不破壞共價鍵,如肽鍵和二硫鍵,故不涉及一級結構的改變。變性劑有溶解型和沉澱型兩類,SDS、尿素和胍鹽是有效的溶解型變性劑,而三氯乙酸、甲醇、和氯仿/異戊醇是有效的沉澱變性劑。一般而言,變性劑應用時常大大過量,破壞氫鍵的變性劑用量至少兩倍於氨基酸的克分子數,如1克蛋白質可可結合1.4g。 SDS溶於水可達25%,對溫度敏感,W/V貯存液最為方便。需要注意的是SDS的鉀鹽是不溶性的,所以SDS溶液中要避免混入鉀鹽。 尿素極易溶於水,可達10mol/L,在8mol/L以上要注意溫度以防止沉澱。尿素在水中緩慢分解形成氨及高度活性的氰酸離子,故要防止高溫。 三氯乙酸與過氯酸(TCA,PCA)都是極好的沉澱劑,能沉澱蛋白質和核酸,前者應用更為廣泛。

去垢劑作為添加劑生長蛋白質晶體是一項很有用的技術。非離子和兩性離子結晶劑在膜蛋白結晶中已經得到很好應用,目前已經變成常規的實驗手段。去垢劑在一些可溶蛋白中也起到了一定的作用,提高了晶體的質量和結果的可重複性 ,促進了單晶的生長, 但具體的影響機制尚不明確。其可能原因是去垢劑的引入使結晶液滴中的蛋白分子更具有親水性,使溶液中同質蛋白質分子增加。

參考文獻