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在糖解作用中，3-磷酸甘油酸是1,3-双磷酸甘油酸在磷酸甘油酸激酶（Phosphoglyceratekinase）的催化中产生。每一分子1,3-双磷酸甘油酸会使一分子的ADP转变成为的ATP，原理是接在1,3-双磷酸甘油酸上的两个磷酸根，其中有一个转移到ADP之上。这个反应需要镁离子（Mg2+）的帮助。接下来3-磷酸甘油酸将会在磷酸甘油酸变位酶（Phosphoglycerate）的催化下生成2-磷酸甘油酸，在此反应中，原本接在3-磷酸甘油酸的第3个碳上的磷酸根，将会转移到变位酶上；然后原本在变位酶上的[[磷酸]] 根，则会接到3-磷酸甘油酸的第2个碳上，反应前后的变位酶整体结构没有变化。与上一步骤相同，此反应同样需要Mg2+。