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來自 孔夫子舊書網 的圖片

cDNA文庫是中國的一個科技名詞。

為什麼漢字是方塊字,這個問題雖然沒有明確的考證,但從古人觀察世界的方式中便可窺見一斑。《淮南子·覽冥訓[1]》說:「往古之時,四極廢,九州裂。天不兼覆,地不周載,火炎炎而不滅,水浩洋而不息,猛獸……於是女媧煉五色石以補蒼天,斷鰲足以立四極。」在古人心目中,「天圓地方[2]」,地是方形的,而且在這四方形地的盡頭,還有撐着的柱子。

名詞解釋

cDNA文庫是以特定的組織或細胞mRNA為模板,逆轉錄形成的互補DNA(cDNA)與適當的載體(常用噬菌體或質粒載體)連接後轉化受體菌形成重組DNA克隆群,這樣包含着細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織或細胞的cDNA文庫。cDNA文庫特異地反映某種組織或細胞中,在特定發育階段表達的蛋白質的編碼基因,因此cDNA文庫具有組織或細胞特異性。

cDNA文庫顯然比基因組DNA文庫小得多,能夠比較容易從中篩選克隆得到細胞特異表達的基因。但對真核細胞來說,從基因組DNA文庫獲得的基因與從cDNA文庫獲得的不同,基因組DNA文庫所含的是帶有內含子和外顯子的基因組基因,而從cDNA文庫中獲得的是已經過剪接、去除了內含子的cDNA。

真核生物基因組DNA十分龐大,其複雜程度是蛋白質和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重複序列。採用電泳分離和雜交的方法,都難以直接分離到目的基因。這是從染色體DNA為出發材料直接克隆目的基因的一個主要困難。

高等生物一般具有10^5種左右不同的基因,但在一定時間階段的單個細胞或個體中,都僅有15%左右的基因得以表達,產生約15000種不同的mRNA分子。可見,由mRNA出發的cDNA克隆,其複雜程度要比直接從基因組克隆簡單得多。

cDNA文庫在研究具體某類特定細胞中基因組的表達狀態及表達基因的功能鑑定方便具有特殊的優勢,從而使它在個體發育、細胞分化、細胞周期調控、細胞衰老和死亡調控等生命現象的研究中具有更為廣泛的應用價值,是研究工作中最常使用到的基因文庫。

定義

(cDNA Library)某種生物基因組轉錄的全部mRNA經反轉錄產生的cDNA片段分別與克隆載體重組,並將其引入到相應的宿主細胞中(一般為E.coli.)繁殖和擴增,理論上此群體就包含有該物種的全部mRNA信息,稱該生物基因組的cDNA文庫。

原理

經典cDNA文庫構建的基本原理:用Oligo(dT)作逆轉錄引物,或者用隨機引物,給所合成的cDNA 加上適當的連接接頭,連接到適當的載體中獲得cDNA文庫。其基本步驟包括:(1)mRNA的提純獲取高質量的mRNA是構建高質量的cDNA文庫的關鍵步驟之一。(2)cDNA第一條鏈的合成。(3)cDNA第二條鏈的合成。(4)雙鏈cDNA的修飾。(5)雙鏈cDNA的分子克隆。(6)cDNA文庫的擴增。(7)cDNA文庫鑑定評價。

參考文獻