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來自 孔夫子舊書網 的圖片

轉染是中國科技名詞。

世界上所有的國家中,只有我們中國的文化[1]是始終沒有間斷過的傳承下來,也只有 「漢字」是世界上唯一的古代一直演變過來沒有間斷過的文字形式[2]

名詞解釋

轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。 從本質上講,和轉化沒有根本的區別。無論是轉染還是轉化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理細菌或培養細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA或RNA能夠容易進入細胞內部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉染為廣義的轉化。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)兩大類。

轉染(transfection)是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用於啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染後24-72小時內(依賴於各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。後者也稱穩定轉染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。儘管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新黴素抗性基因),潮黴素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反覆篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。

轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優化DNA與轉染試劑比例,細胞數量,培養及檢測時間等。

分類編

化學

包括:

1.DEAE-葡聚糖法

DEAE-葡聚糖是最早應用哺乳動物細胞轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合後接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地應用於瞬時表達的研究,但用於穩定轉染卻不是十分可靠。

2.磷酸鈣法

磷酸鈣法是磷酸鈣共沉澱轉染法,因為試劑易取得,價格便宜而被廣泛用於瞬時轉染和穩定轉染的研究,先將DNA和氯化鈣混合,然後加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉澱,最後把含有沉澱的混懸液加到培養的細胞上,通過細胞胞膜的內吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細胞內的核酸酶活性而保護外源DNA免受降解.

3.人工脂質體法。

人工脂質體法採用陽離子脂質體,具有較高的轉染效率,不但可以轉染其他化學方法不易轉染的細胞系,而且還能轉染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質。此外,脂質體體外轉染同時適用於瞬時表達和穩定表達,與以往不同的是脂質體還可以介導DNA和RNA轉入動物和人的體內用於基因治療。LipoFiterTM脂質體轉染試劑(LipoFiterLiposomalTransfectionReagent)是一種適合於把質粒或其它形式的核酸,以及核酸蛋白複合物轉染到培養的真核細胞中的高效陽離子脂質體轉染試劑。它可以和帶負電荷的核酸結合後形成複合物,當複合物接近細胞膜時被內吞成為內體進入細胞質,隨後DNA複合物被釋放進入細胞核內,至於DNA是如何穿過核膜的,其機理目前還不十分清楚。

物理

包括:①顯微注射②電穿孔③基因槍等,顯微注射雖然費力,但是非常有效的將核酸導入細胞或細胞核的方法。這種方法常用來製備轉基因動物,但卻不適用於需要大量轉染細胞的研究。電穿孔法常用來轉染如植物原生質體這樣的常規方法不容易轉染的細胞。電穿孔靠脈衝電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內。導入的效率與脈衝的強度和持續時間有關係,基因槍依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導入細胞內,這種方法適用於培養的細胞核在體的細胞。

參考文獻