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| 抑制性減法雜交 |
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抑制性減法雜交 SSH是RDA技術的發展，能有效克服RDA或cDNA RDA技術難以解決的問題。SSH的核心技術是抑制性PCR，它是一種將檢測子cDNA單鏈標準化步驟和消減雜交步驟結合為一體的技術。
基本信息
中文名稱 抑制性減法雜交 [1]
外文名稱 suppression subtractive hybridization
屬性 抑制性減法
性質 雜交
英文簡稱 ssh
簡介
抑制性減法雜交suppression subtractive hybridization，ssh 1996年槳遙婚乃，L.Diathebko在RDA的基礎上建立了抑制性減法雜交技術，該技術是RDA技術的發展，能有效克服RDA或cDNA RDA技術難以解決的問題。
主要原理
其中標準化步驟均等了檢測子中的cDNA單鏈豐度，兆雅照而消減雜交步驟去除了檢測子和驅趕子之間的共同序列，使檢測子和驅趕子之間不同的序列得到擴增。因此SSH顯著增加了獲得低豐度表達差異cDNA的概率，簡化了對消減文庫的分析。
抑制PCR是利用鏈內復性優先於鏈間復性的原理，使非目標序列片段兩端的長反向重複序列在復性時產生"鍋柄樣"結構或"髮夾結構"而無法於引物配對，從而選擇性的抑制非目標序列的擴腳重想增。同時，根據雜交的二級動力學原理，豐度高的單鏈cDNA復性時產生同源雜交速度要快於豐度低的單鏈cDNA，從而使得豐度存在差異的cDNA相對含量趨於基本一致
製作過程
(1)製備兩種試驗材料的mRNA並反轉錄成cDNA，分別作為檢測cDNA和驅趕cDNA。用限制性核酸內切酶切割，產生大小適當的平頭末端cDNA片段
(2)將檢測cDNA分成均等的兩份。分別接上接頭1或接頭2，接頭有一長鏈和一短鏈組成的一段是平末端的雙鏈cDNA分子。長鏈3'端與cDNA5'端相連。長鏈外榜滲嫌側序列與第一次PCR引物序列相同，內側序列則與第二次PCR引物序列相同。此外，接頭上含有T7啟動子序列及內切酶識別位點。為以後將該片段插入克隆載體和測序疊肯地提供便利。
(3)第一次差減雜交。
(4)第二次差減雜交
(5)第一次PCR反應
(6)第二次PCR反應
(7)差異片段的初步篩選
參考來源