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《實時熒光PCR技術》，主編李金明，出版社 科學出版社，版次 1，出版時間 2016年10月，開本 16，作者 無，裝幀 圓脊精裝，頁數 512，字數 742，ISBN編碼 9787030498274。

科學出版社是中國最大的綜合性科技出版機構，由前中國科學院編譯局與1930年代創建的有較大影響的龍門聯合書局合併而來。科學出版社比鄰皇城根遺址公園，是一個歷史悠久、力量雄厚，以出版學術書刊為主的開放式出版社。

內容簡介

本書在第1版基礎上修訂而成，分34章，系統闡述了實時熒光 PCR技術的基礎理論和臨床檢測方法，包括臨床 PCR技術的發展歷史及趨勢，實時熒光 PCR技術的基本原理和方法，臨床 PCR實驗室的設計及質量管理體系的建立，臨床 PCR檢驗標本的採集、運送、保存及核酸提取，實時熒光 PCR測定的數據處理，實時熒光 PCR儀及其發展，臨床 PCR檢驗儀器設備的使用、維護和校準，臨床 PCR檢驗的質量保證，病毒核酸檢測的標準物質及其應用，以及各型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒G1、人乳頭瘤病毒、巨細胞病毒、嚴重急性呼吸綜合徵冠狀病毒、EB病毒、流感病毒、風疹病毒、麻疹病毒、手足口病病原體、埃博拉病毒、中東呼吸綜合徵冠狀病毒、沙眼衣原體、結核桿菌、淋病奈瑟菌、幽門螺桿菌、肺炎支原體、剛地弓形蟲、解脲支原體等實時熒光 PCR檢測及臨床意義、EGFR基因、KRAS基因、BRAF基因、 PIK3CA基因等實時熒光 PCR檢測及臨床意義.

目錄

第1章臨床PCR技術的發展歷史及趨勢(1)

第一節PCR的起源和耐熱DNA聚合酶的應用(1)

一、PCR的起源(1)

二、耐熱DNA聚合酶的應用(2)

第二節PCR的基本原理(3)

第三節PCR的反應動力學(5)

第四節PCR的擴增體系和擴增條件(5)

一、PCR擴增體系的基本要素(5)

二、PCR的標準擴增體系(8)

三、PCR擴增的增強劑(9)

四、降落PCR(9)

五、熱啟動PCR(10)

六、COLDGPCR(10)

七、PCR擴增結果分析(11)

第五節PCR的特點(12)

一、高特異性(12)

二、高靈敏度(12)

三、簡便快速(12)

四、特定的低純度標本也可使用(12)

第六節PCR的發展(12)

參考文獻(13)

第2章實時熒光PCR技術的基本原理和方法(14)

第一節發展歷程(14)

第二節基本原理(15)

一、PCR擴增的理論模式(15)

二、實時熒光PCR的理論基礎(16)

三、TaqMan實時熒光PCR的基本原理(17)

四、雙鏈DNA交聯熒光染料實時熒光PCR的基本原理(19)

五、雙雜交探針實時熒光PCR的基本原理(20)

六、分子信標實時熒光PCR的基本原理(20)

七、蠍形探針實時熒光PCR的基本原理(21)

八、數字實時熒光PCR的基本原理(24)

第三節引物、探針的特點及設計軟件(26)

一、引物的特點(26)

二、探針的特點(26)

三、引物和探針設計軟件(27)

第四節多重實時熒光PCR(28)

參考文獻(28)

第3章臨床PCR實驗室的設計及質量管理體系的建立(30)

第一節實驗室的分區規劃設計(30)

一、標本的接收(30)

二、實驗室分區設計的一般原則及工作流程(31)

第二節實驗室質量管理體系的建立(39)

一、實驗室質量管理概述(39)

二、實驗室質量管理的特點(41)

三、質量體系文件的編寫(42)

第三節實驗室的記錄管理(56)

一、記錄的種類(56)

二、記錄的標識(56)

三、記錄的填寫(57)

四、記錄的封面和目錄(59)

五、記錄的良好保存(59)

六、記錄的保存期限(59)

七、過期記錄的處理(59)

八、記錄表格樣式的持續改進(59)

九、電子記錄的管理(60)

第四節實驗室驗收與實驗室認可(60)

一、實驗室認可的由來及目的(60)

二、實驗室認可與認證的區別(61)

三、實驗室驗收與實驗室認可的關係(61)

參考文獻(62)

第4章臨床PCR檢驗標本的採集、運送、保存及核酸提取(63)

第一節標本採集、運送、保存(63)

一、標本採集(63)

二、標本運送(65)

三、標本保存(65)

第二節常見臨床標本的處理和保存(66)

一、血清(漿)樣本(66)

二、全血樣本(66)

三、外周血單個核細胞(66)

四、痰(66)

五、棉拭子(67)

六、膿液(67)

七、體液(68)

八、乳汁(68)

九、組織(69)

第三節臨床標本中PCR抑制物(70)

一、臨床標本中PCR抑制物的來源及作用機制(70)

二、幾種常見抑制物的作用機制及對策(70)

第四節核酸的提取方法(72)

一、DNA提取的經典方法(72)

二、RNA的提取(73)

三、核酸提取的改良方法(74)

參考文獻(78)

第5章實時熒光PCR測定的數據處理(83)

第一節基本概念(83)

第二節實時熒光PCR外標**定量的數學模型(85)

一、基本計算公式的推導(85)

二、縱坐標為起始拷貝數對數值橫坐標為Ct時的數學模型(85)

三、縱坐標為Ct橫坐標為起始拷貝數時的數學模型(86)

第三節實時熒光PCR相對定量的數學模型(87)

一、相對定量的標準曲線法(87)

二、2-ΔΔCt法(89)

三、2-ΔΔCt的改良方法(89)

四、多重PCR法(91)

第四節用曲線擬合的方法進行數據處理(92)

一、Liu與Saint的方法(92)

二、Ramakers等的方法(92)

三、Tichopad等的方法(92)

參考文獻(93)

第6章實時熒光PCR儀及其發展(94)

第一節PCR儀的發展歷史及基本原理(94)

一、空氣驅動循環PCR儀(94)

二、變溫金屬塊PCR儀(95)

第二節實時熒光PCR儀簡介(95)

一、美國ABI公司生產的實時熒光PCR儀(95)

二、美國Cepheid公司的SmartCycler實時熒光PCR儀(98)

三、美國BioGRad公司的實時熒光PCR儀(99)

四、美國Stratagene公司的實時熒光PCR儀(100)

五、Roche公司的LightCycler實時熒光PCR儀(101)

六、Corbert的RotorGene實時熒光PCR儀(103)

七、Eppendorf公司的Mastercyclereprealplex實時熒光PCR儀(104)

第三節實時熒光PCR儀選擇(104)

一、儀器使用的廣泛程度(104)

二、工作量(104)

三、耗材的開放性(105)

四、硬件設計特點(105)

五、檢測通道和可檢測的熒光染料(105)

六、溫度梯度功能(105)

七、軟件功能(105)

第四節數字PCR儀簡介(106)

一、微流控芯片數字PCR(107)

二、液滴數字PCR(107)

第五節實時熒光PCR儀的使用、維護和校準(108)

一、實時熒光PCR儀使用中的注意事項(108)

二、維護和校準(108)

參考文獻(111)

第7章臨床PCR檢驗儀器設備的使用、維護和校準(112)

第一節天平(112)

一、電子分析天平及其分類(112)

二、天平的正確使用(113)

三、天平的選擇(114)

四、天平的維護和校準(114)

第二節離心機(115)

一、離心機離心的基本原理(115)

二、離心力和相對離心力(116)

三、離心時間(116)

四、離心轉子的選擇(119)

五、離心管(119)

六、離心機的分類(119)

七、離心機的使用和維護(120)

第三節微量加樣器(122)

一、微量加樣器的一般原理及分類(122)

二、加樣器的選擇及使用(123)

三、加樣器的維護和校準(129)

參考文獻(133)

第8章臨床PCR檢驗的質量保證(134)

第一節概述(134)

一、基本概念(134)

二、質量保證、室內質量控制和室間質量評價之間的關係(136)

三、標本採集、運送、保存及其質量控制(136)

第二節室內質量控制(137)

一、測定前質量控制(137)

二、核酸樣本的製備、擴增檢測及其質量控制(144)

三、統計學質量控制(146)

第三節室間質量評價(160)

一、室間質量評價的程序設計(161)

二、室間質量評價的局限性(164)

參考文獻(165)

第9章病毒核酸檢測的標準物質及其應用(167)

第一節概述(167)

一、基本概念(167)

二、病毒核酸檢測用標準物質的種類和溯源關係(169)

第二節病毒核酸檢測用標準物質的製備(170)

一、原材料的選擇和分裝(171)

二、均勻性和穩定性(172)

三、定值(174)

四、標準物質的保存(175)

五、核酸檢測用標準物質的意義(175)

六、核酸檢測用標準物質的展望(176)

參考文獻(179)

第10章甲型肝炎病毒實時熒光PCR檢測及臨床意義(182)

一、HAV的特點(182)

二、HAVRNA實時熒光RTGPCR檢測(182)

三、HAVRNA檢測的臨床意義(185)

參考文獻(186)

第11章乙型肝炎病毒實時熒光PCR檢測及臨床意義(187)

一、HBV的特點(187)

二、HBVDNA實時熒光PCR測定(190)

三、HBV變異的檢測及其臨床意義(196)

四、HBVcccDNA的檢測及其臨床意義(200)

五、HBV基因型的檢測及其臨床意義(201)

六、HBVRNA的檢測及其臨床意義(204)

七、HBV全基因組測定及其臨床意義(205)

參考文獻(206)

第12章丙型肝炎病毒實時熒光RTGPCR檢測及臨床意義(210)

一、HCV的形態和基因組結構特點(210)

二、HCV的複製特點(211)

三、HCV的變異特點及基因型(211)

四、HCVRNA實時熒光RTGPCR測定(212)

五、HCV基因分型檢測及其臨床意義(220)

參考文獻(223)

第13章人免疫缺陷病毒G1實時熒光RTGPCR檢測及臨床意義(226)

一、HIVG1的特點(226)

二、HIVG1RNA的實時熒光RTGPCR測定(227)

三、HIVG1RNA測定的臨床意義(234)

參考文獻(235)

第14章人乳頭瘤病毒實時熒光PCR檢測及臨床意義(237)

一、HPV的形態和基因結構特點(237)

二、HPV的體內複製特點(239)

三、病毒的變異特點(239)

四、HPV基因型(240)

五、HPVDNA的實時熒光PCR測定(240)

六、HPVDNA檢測的臨床意義(248)

參考文獻(250)

第15章巨細胞病毒實時熒光PCR檢測及臨床意義(253)

一、人類巨細胞病毒的特點(253)

二、人類巨細胞病毒實時熒光PCR測定(254)

三、巨細胞病毒PCR檢測的臨床意義(267)

參考文獻(268)

第16章嚴重急性呼吸綜合徵冠狀病毒實時熒光RTGPCR檢測及臨床意義(269)

一、SARSGCoV的特點(269)

二、SARSGCoVRNA實時熒光RTGPCR檢測(270)

三、SARSGCoVPCR檢測的臨床意義(286)

參考文獻(286)

第17章EB病毒實時熒光PCR檢測及臨床意義(288)

一、EB病毒的特點(288)

二、EB病毒實時熒光PCR測定(289)

三、EB病毒PCR檢測的臨床意義(294)

參考文獻(295)

第18章流感病毒實時熒光RTGPCR檢測及臨床意義(296)

一、流感病毒的特點(296)

二、流感病毒的實時熒光RTGPCR測定(298)

三、流感病毒RTGPCR檢測的臨床意義(320)

參考文獻(320)

第19章風疹病毒實時熒光RTGPCR檢測及臨床意義(321)

一、風疹病毒的形態和基因組結構及功能特點(321)

二、風疹病毒的複製特點(322)

三、風疹病毒的變異特點及基因型(323)

四、風疹病毒實時熒光RTGPCR測定及其臨床意義(323)

參考文獻(330)

第20章麻疹病毒實時熒光RTGPCR檢測及臨床意義(332)

一、麻疹病毒的形態和基因組結構及功能特點(332)

二、麻疹病毒的複製特點(334)

三、麻疹病毒的變異特點及基因型(335)

四、麻疹病毒實時熒光RTGPCR測定及其臨床意義(335)

參考文獻(339)

第21章手足口病病原體實時熒光RTGPCR檢測及臨床意義(341)

一、手足口病病原體的形態和基因組結構特點(341)

二、shou足口病病原體複製特點(341)

三、手足口病病原體實時熒光RTGPCR測定及其臨床意義(342)

四、手足口病病原體檢測及其臨床意義(349)

參考文獻(349)

第22章埃博拉病毒實時熒光定量RTGPCR檢測及臨床意義(351)

一、EBOV的形態和基因組結構特點(351)

二、EBOV的基因分型(352)

三、EBOVRNA實時熒光RTGPCR測定及其臨床意義(352)

參考文獻(360)

第23章中東呼吸綜合徵冠狀病毒實時熒光RTGPCR檢測及臨床意義(361)

一、MERSGCoV的形態和基因組結構特點(361)

二、MERSGCoV的感染過程(362)

三、MERSGCoVRNA實時熒光RTGPCR測定及其臨床意義(363)

參考文獻(379)

第24章沙眼衣原體實時熒光PCR檢測及臨床意義(381)

一、沙眼衣原體的形態和基因組結構特點(381)

二、沙眼衣原體的實時熒光PCR測定(381)

三、沙眼衣原體PCR檢測的臨床意義(391)

參考文獻(391)

第25章結核桿菌實時熒光PCR檢測及臨床意義(394)

一、結核桿菌的特點(394)

二、結核桿菌實時熒光PCR檢測(395)

三、結核桿菌PCR檢測的臨床意義(405)

參考文獻(406)

第26章淋病奈瑟菌實時熒光PCR檢測及臨床意義(407)

一、淋病奈瑟菌的特點(407)

二、淋病奈瑟菌實時熒光PCR測定(408)

三、淋病奈瑟菌PCR檢測的臨床意義(418)

參考文獻(419)

第27章幽門螺桿菌實時熒光PCR檢測及臨床意義(420)

一、幽門螺桿菌的特點(420)

二、幽門螺桿菌實時熒光PCR測定(421)

三、幽門螺桿菌PCR檢測的臨床意義(430)

參考文獻(430)

第28章肺炎支原體實時熒光PCR檢測及臨床意義(432)

一、肺炎支原體的結構特點(432)

二、肺炎支原體的實時熒光PCR檢測(432)

三、肺炎支原體PCR檢測的臨床意義(437)

參考文獻(437)

第29章剛地弓形蟲實時熒光PCR檢測及臨床意義(438)

一、剛地弓形蟲的特點(438)

二、剛地弓形蟲的實時熒光PCR檢測(439)

三、剛地弓形蟲PCR檢測的臨床意義(444)

參考文獻(444)

第30章解脲支原體實時熒光PCR檢測及臨床意義(446)

一、解脲支原體的特點(446)

二、解脲支原體實時熒光PCR檢測(446)

三、解脲支原體PCR檢測的臨床意義(451)

參考文獻(452)

第31章EGFR基因實時熒光PCR檢測及臨床意義(453)

一、EGFR基因特點及常見突變類型(453)

二、相關靶向治療藥物(454)

三、EGFR基因突變實時熒光PCR測定及其臨床意義(455)

參考文獻(463)

第32章KRAS基因實時熒光PCR檢測及臨床意義(466)

一、KRAS基因特點及常見突變類型(466)

二、KRAS基因突變實時熒光PCR測定及其臨床意義(466)

參考文獻(477)

第33章BRAF基因突變的實時熒光PCR檢測及臨床意義(479)

一、BRAF的基因組結構特點(479)

二、BRAF基因突變實時熒光PCR測定及其臨床意義(480)

參考文獻(484)

第34章PIK3CA基因突變實時熒光PCR檢測及臨床意義(486)

一、PIK3CA的基因結構特點(486)

二、PIK3CA基因突變實時熒光PCR測定及其臨床意義(487)

參考文獻(497)