HLA分型查看源代码讨论查看历史

来自 孔夫子旧书网 的图片

HLA分型是全国科学技术名词审定委员会审定、公布的科技术语。

随着社会制度的不断发展与进步，中国的汉字也在不断演化着，从最初的甲骨文渐渐发展到了小篆，后来文化进一步发展后，才出现了”汉字”这种说法。

名词解释

HLA(humanleucocyteantigen)复合体是人类多态性最丰富的遗传系统，定位于第6号染色体短臂6P21.31区，长3600kb。1999年已完成全部序列分析及基因定位，在此区域内共确认了224个基因座位中128个为功能性基因，其中39.8%和免疫功能相关。HLA基因根据其编码分子的分布与功能不同分为3个区，即Ⅰ类基因区，Ⅱ类基因区，Ⅲ类基因区。

HlA复合体中很多基因座位的DNA序列在人群中存在许多变异体，即HLA含大量的等位基因。由于来自父母的两条第6染色体所有的HLA等位基因完全相同的概率极小，这就使每一个体所具有的HlA等位基因及其产物具有该个体的独特性。HLA等位基因频率不仅在不同人群、不同地域存在明显差异，而且与某些疾病的发生存在一定的相关性。HLA分型为器官移植的供受者、选择提供有效的手段，还应用于法医学DNA分型和亲子鉴定。因此，HLA分型不仅为了解人种来源和民族的迁徙提供重要的科学资料，而且在医学实践中有重要意义。但是，HLA高度多态性也为器官移植时寻找合适的供体带来了很大的困难 [1] 。

方法

HLA分型方法主要包括血清学分型和DNA分型。血清学分型技术侧重于分析HA抗原的特异性，DNA分型方法则侧重于分析基因本身的多态性。

1.血清学方法：1964Terasaki建立了HLA微量淋巴胞毒实验方法来分析受试者的HLA型别，其主要过程是从全血或淋巴组织中分离出淋巴细胞，与HLA-特异性抗体包被的微孔板孵育，加入补体，使能与淋巴细胞表面HA抗原结合的特异性抗体通过经典途径激活补体，导致靶细胞水解(淋巴细胞毒性)。多年来这种血清学方法是确定HA配型的重要方法，也是国际通用的标准技术。然而血清学方法存在诸多限制，如确定HLA特异性抗体需要做大量的筛查工作，一些HLA抗原很难用血清学方法鉴定；HLA的交叉反应影响了分型结果的准确性，给亚型的进一步确定带来困难等。因此近年来更多采用的是HLA的基因分型方法1990年世界卫生组织WHO统一了HLA基因分型的命名以及与血清学分型的对应关系，使HLA的研究转入基因水平的研究。

2.DNA分型方法：DNA分型主要分为两种方法：基于核酸序列识别的方法和基于序列分子构型的方法，常用的方法大致可分为大类：

①限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism，RFP)。其原理是不同的DNA膜板山于序列的差异在限制性内切酶作用下将被切成大小不同的片段，其电泳迁移率也发生差异，经电泳分离、印迹、探针杂交等一系列技术处理来分析目的基因。

②聚合酶链式反应寡核苷酸探针杂交方法PCR-SSO(sequence specifie oligonucleotide，SSO)。原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针，通过杂交的方法进行扩增片段的分析鉴定。

③聚合酶链式反应单链构象多态性分析(PCR- single strand conformational polymorphism，PCR-SSCP)。PCR产物经变性为DNA单链，用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，只有一个核苷酸发生变异，其电泳迁移卒就会改变，从而进行多态性分析。

④DNA序列测定(sequencing)。能直接读到目的片段核苷酸的完整序列，重复性好，分辨率高，自动化程度高，是HA分型最直接、最精确、最可靠的方法。常用于对新发现的HLA特异性进行DNA序列分析。

⑤特异性引物PCR技术(PCR sequence- specific primer，PCR-SSP)。采用特异性等位基因引物作PCR，扩增得到的DNA片段因分子量的不同而被凝胶电泳方法区别。

以上HA分型技术各有其自身的特点：DNA测序测定的分型方法最直接、最精确、最可靠，常用于对新发现的HA特异性进行DNA序列分析，所需设备昂贵；采用PCR-RFLP、PCR-SSCP技术进行HLA分型则敏感性和精确性较高，检测时间比较短，但方法学复杂；PCR-SSP和SSO技术具有高特异性与敏感性、简捷、快速、结果容易判断，是比较理想的高效检测配型手段，其有相当的应用前景。

3.HLA交叉反应组(CRFG)：HLA基因分型的精确度明显提高，大幅度减少了GVHD的发生率。但正是由于基因分型的精确，找到基因亚型完全相合的供体非常困难。同时临床资料显示，同样是供受者HLA错配，有些错配明显影响移植物存活，而有些错配并无显著影响。因此，临床上需要种更为实用、临床可行的配型策略，即确定HLA虽不合但可以接受或可以允许的供者。抗原A、B、DR基因位点在形态学上有高度的多态性，但它们各自蛋白基因产物氨基酸残基却只有微小的差别。某些HA抗原在分子结构接近，具有公共抗原决定簇，可与某一抗体发生交叉反应。这些抗原被称为交叉反应组(cross reactive group，CRFG)，而其根本区别在于氨基酸残基不同。1996年Terasaki提出了新的配型策略――交叉反应组配型，又称HLA氨基酸残基配型ResM。

技术发展

HLA系统研究从70年代到80年代末期主要是血清学研究，90年代以来，HLA进入了分子水平研究阶段。HLA分型技术同样走过了这一历程。建立于60年代的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性。1991年第11届国际HLA专题讨论上提出了HLA的DNA分型方法，随着测序技术的突飞猛进，基于DNA序列的分型方法已经取代了传统的血清学及细胞学分型方法。现DNA分型方法主要分为两种：基于核酸序列识别的方法和基于序列分子构型的方法。基于核酸序列识别的方法主要有：PCR-RFLP,PCR-SSO,PCR-SSP和PCR-SBT。其中PCR-SBT测序方法是现世界卫生组织（WHO）推荐的HLA分型方法的“金标准”。