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水曲柳腋芽微繁技术应用案例针对于水曲柳无性繁殖，组织培养，腋芽增殖保证繁殖个体稳定不发生变异的问题。在2018年-2021年，在东北林业大学生命科学学院组织培养室，利用组织培养技术在三角瓶和生物反应器中进行水曲柳的繁殖。

一、应用场景

针对于水曲柳无性繁殖，组织培养，腋芽增殖保证繁殖个体稳定不发生变异的问题。在2018年-2021年，在东北林业大学生命科学学院组织培养室，利用组织培养技术在三角瓶和生物反应器中进行水曲柳的繁殖。在2019-2021年，对水曲柳进行生根移栽和苗期管理。

二、主要解决的问题

该技术根据水曲柳组织培养中面临的一系列难题，制定科学合理的外植体的选择、培养基的筛选、生长调节剂配比以及继代时防止褐化、老化等现象。

三、技术要点

外植体类型选取水曲柳优树当年生穗条上带有顶芽或者腋芽的茎节作为组织培养的外植体。培养基条件选择在WPM基础培养基中外源添加6-BA（benzyladenine）、TDZ（thidiazuron）、ZT（zeatin）。外界培养环境组织培养室光照强度80 μmol*m-2*s-1、光照周期为光16h/暗8h、温度25±2℃、湿度60%-70%；移栽温室大棚光照强度80 μmol*m-2*s-1、光照周期为光16h/暗8h、温度25 ℃、湿度90 %环境条件下培养。

外植体采集与处理：

(1)外植体消毒处理以优树穗条的茎节顶芽及腋芽作为组织培养外植体，在接种前用洗涤剂浸泡10min之后，流动水冲洗30min，然后转入超净工作台中，以75%乙醇浸泡30s，边泡边摇，灭菌的蒸馏水冲洗3-4遍，每次5min，然后转入0.1%升汞中，边泡边摇2min，再用灭菌的蒸馏水洗4遍，每次5min，取灭菌（121℃灭菌20min）的刀具、镊子、培养皿，将消毒的茎段放入培养皿中，切去茎节两端，以灭菌的滤纸吸干后，接入初代培养基中培养。

(2)组培材料选择以优树穗条的茎节顶芽及腋芽作为组织培养外植体接种于诱导培养基上进行培养。

培养基配制

(1)初代培养基选择WPM作为基础培养基，含有30g/L蔗糖和0.6mg/L TDZ的液体培养基，pH为6.0。

(2)继代培养基继代培养选择固体培养基，WPM固体培养基中添加0.05 mg·L-1 TDZ+ 0.6 mg·L-1 BA；伸长增殖培养基中添加1.0 mg/L ZT。

(3)生根培养基生根培养在基础培养基中添加1.4mg/L IBA和0.7mg/L NAA。

组织培养：

(1)植物组培条件黑暗条件下液体诱导腋芽萌发时摇床转速为60rpm/min；光照条件下光照强度为80 μmol*m-2*s-1、光16h/暗8h、温度25±2℃、湿度60%-70%。

(2)诱导培养顶芽和茎节外植体经初代培养基（WPM+0.6mg/L TDZ）诱导腋芽萌发启动，黑暗条件下培养一个继代（20d）。

(3)增殖培养将初代培养诱导形成新芽，接种到固体培养基（WPM+0.05mg/L TDZ+0.6mg/L 6-BA）上培养一个继代（20d），将长大的不定芽连带基部愈伤组织一起转入固体伸长培养基（WPM+1mg/L ZT），继续继代增殖培养25-35d。

(4)壮苗生根培养将增殖培养的不定枝丛完整接种到壮苗生根培养基（WPM+1.4mg/L IBA+0.7mg/L NAA）中，培养20d-30d后待不定枝高3cm~5cm，基部形成不定根，切下单个不定枝转入生根培养基再次生根，根系长约1cm左右即可移栽。

组培苗移栽：

(1)移栽基质按照草炭土：蛭石（3：1）的基质混匀后灭菌，装入无纺布育苗袋（口径6~8cm），用不含蔗糖和琼脂的生根培养基（WPM+1.4mg/L IBA＋0.7mg/L NAA）浇透。

(2)培养环境用镊子将3~5cm，带有3个以上主根的半木质化组培苗栽植于上述育苗袋基质中，将其摆放于育苗盒中。将育苗盒置于培养条件为有喷雾装置和遮荫网的温室大棚内，控制在温度25 ℃、湿度90 %、光照强度80 μmol*m-2*s-1、光16h/暗8h环境条件下培养。苗期管理移栽7d后减少喷施水分，经常通风。

经常检查新叶情况，预防病虫害。建立苗木档案每批移栽驯化的苗木，配上相应的株系标签，建立生产档案为后期苗木分级与定植作基础。

四、应用成效

该技术按水曲柳液-固循环繁殖方式，按照一棵苗有5个芽点计算，70d一个循环，一年可以循环5次，一颗苗一年可以增殖为15625棵苗，与普通繁殖相比，该方法可以明显增加繁殖率。该技术较为科学、合理，在生产中具有良好的可操作性和指导性，显著提高水曲柳繁育技术水平，提高科技成果的转化率，长远来看具有显著的经济和社会效益。

五、适用范围

该技术主要使用液—固交替法繁殖水曲柳，适用于生物反应器繁殖，然后再利用培养瓶中固体壮苗，最后可以在温室进行移栽，苗期管理。