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| 抑制性减法杂交 |
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抑制性减法杂交 SSH是RDA技术的发展，能有效克服RDA或cDNA RDA技术难以解决的问题。SSH的核心技术是抑制性PCR，它是一种将检测子cDNA单链标准化步骤和消减杂交步骤结合为一体的技术。
基本信息
中文名称 抑制性减法杂交 [1]
外文名称 suppression subtractive hybridization
属性 抑制性减法
性质 杂交
英文简称 ssh
简介
抑制性减法杂交suppression subtractive hybridization，ssh 1996年桨遥婚乃，L.Diathebko在RDA的基础上建立了抑制性减法杂交技术，该技术是RDA技术的发展，能有效克服RDA或cDNA RDA技术难以解决的问题。
主要原理
其中标准化步骤均等了检测子中的cDNA单链丰度，兆雅照而消减杂交步骤去除了检测子和驱赶子之间的共同序列，使检测子和驱赶子之间不同的序列得到扩增。因此SSH显著增加了获得低丰度表达差异cDNA的概率，简化了对消减文库的分析。
抑制PCR是利用链内复性优先于链间复性的原理，使非目标序列片段两端的长反向重复序列在复性时产生"锅柄样"结构或"发夹结构"而无法于引物配对，从而选择性的抑制非目标序列的扩脚重想增。同时，根据杂交的二级动力学原理，丰度高的单链cDNA复性时产生同源杂交速度要快于丰度低的单链cDNA，从而使得丰度存在差异的cDNA相对含量趋于基本一致
制作过程
(1)制备两种试验材料的mRNA并反转录成cDNA，分别作为检测cDNA和驱赶cDNA。用限制性核酸内切酶切割，产生大小适当的平头末端cDNA片段
(2)将检测cDNA分成均等的两份。分别接上接头1或接头2，接头有一长链和一短链组成的一段是平末端的双链cDNA分子。长链3'端与cDNA5'端相连。长链外榜渗嫌侧序列与第一次PCR引物序列相同，内侧序列则与第二次PCR引物序列相同。此外，接头上含有T7启动子序列及内切酶识别位点。为以后将该片段插入克隆载体和测序叠肯地提供便利。
(3)第一次差减杂交。
(4)第二次差减杂交
(5)第一次PCR反应
(6)第二次PCR反应
(7)差异片段的初步筛选
參考來源