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| + | '''中文名称''' ：一抗二抗 | ||
| − | 第一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。 | + | '''外文名称''' ：resistance No.1、 resistance No. |
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| + | '''全 称''' ：第一抗体、第二抗体 | ||
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| + | '''领 域''' ：医学 | ||
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| + | 第一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。<ref>[https://www.360kuai.com/pc/94df6d916bf4b9bee?cota=4&kuai_so=1&tj_url=so_rec&sign=360_da20e874&refer_scene=so_3 一抗和二抗的区别，快资讯 2020年12月15日] </ref> | ||
== 简介 == | == 简介 == | ||
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=== 第二抗体 === | === 第二抗体 === | ||
第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。用抗AIV H5亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体。 | 第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。用抗AIV H5亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体。 | ||
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== 区别 == | == 区别 == | ||
| − | 第一抗体就是平常所说的抗体，即能和抗原特异性结合。第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。也就是说，抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应答，由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团(底物和二抗)。一抗:可以特异结合底物，就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。二抗:可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团)，作用是检测一抗。 如果一抗自己带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团)，则不需要二抗。但这样成本很高，因为一种一抗只识别一种底物。所以如今的设计一般是二抗带上可检测标记，再来检测一抗。而一抗识别底物。这样，当一抗结合到底物上，就可以通过二抗检测出来。 | + | 第一抗体就是平常所说的抗体，即能和抗原特异性结合。第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。也就是说，抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应答，由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊[[ 蛋白质]] 。一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团(底物和二抗)。一抗:可以特异结合底物，就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。二抗:可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团)，作用是检测一抗。 如果一抗自己带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团)，则不需要二抗。但这样成本很高，因为一种一抗只识别一种底物。所以如今的设计一般是二抗带上可检测标记，再来检测一抗。而一抗识别底物。这样，当一抗结合到底物上，就可以通过二抗检测出来。 |
== 举例 == | == 举例 == | ||
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| − | * 最多见的是"三抗"阳性:"抗-HBs+、抗-HBe、和抗- HBc+"，这说明乙肝病毒感染结束，体内病毒清除，提示这个人免疫功能十分正常，可以献血，也可以应用他的血制造高效价乙肝免疫球蛋门(HBIG)，用于对乙肝的防治。 | + | * 最多见的是"三抗"阳性:"抗-HBs+、抗-HBe、和抗- HBc+"，这说明[[ 乙肝病毒]] 感染结束，体内病毒清除，提示这个人免疫功能十分正常，可以献血，也可以应用他的血制造高效价乙肝免疫球蛋门(HBIG)，用于对乙肝的防治。 |
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* 二抗阳性"即"抗-HBs+和抗-HBe+"或"抗-HBs+和抗-HBc+" | * 二抗阳性"即"抗-HBs+和抗-HBe+"或"抗-HBs+和抗-HBc+" | ||
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* 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 | * 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 | ||
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| − | * 结果判定:可于白色背景上，直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以"+"、"-"号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 | + | * 结果判定:可于白色背景上，直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以"+"、"-"号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。<ref>[https://www.bilibili.com/video/av40192223 何为一抗和二抗，为什么要加二抗？，B站 2019年1月8日] </ref> |
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* 方法二 用于检测未知抗体的间接法: | * 方法二 用于检测未知抗体的间接法: | ||
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* 加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔 中,置37℃孵育1小时,洗涤。 | * 加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔 中,置37℃孵育1小时,洗涤。 | ||
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| − | * 同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml， 37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。 | + | * 同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml， 37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤 。<ref>[https://www.360kuai.com/pc/9a02e6c6c65cf9a54?cota=4&kuai_so=1&tj_url=so_rec&sign=360_da20e874&refer_scene=so_3 免疫组化二抗原理及选择?，快资讯 2020年12月3日] </ref> |
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| + | == 注意事项 == | ||
| + | * 1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。 | ||
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| + | * 2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括: | ||
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| + | * (1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、[[聚苯乙烯]]、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。当前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。 | ||
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| + | * (2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml 。 | ||
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| + | * (3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取"方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 | ||
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| + | * (4) [[酶]]的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。<ref>[https://www.abace-biology.com/tech-antibody5.htm 如何选择一抗和二抗？，安必奇生物网 2019年10月8日] </ref> | ||
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於 2021年1月6日 (三) 11:22 的最新修訂
| 一抗二抗 |
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| 一抗二抗 |
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中文名稱 ：一抗二抗 外文名稱 ：resistance No.1、 resistance No. 全 稱 ：第一抗體、第二抗體 領 域 ：醫學 |
第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。第二抗體是能和抗體結合，即抗體的抗體，其主要作用是檢測抗體的存在，放大一抗的信號。[1]
簡介
第一抗體
第一抗體就是能和非抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。種類包括單克隆抗體和多克隆抗體。
第二抗體
第二抗體是能和抗體結合，即抗體的抗體，其主要作用是檢測抗體的存在，放大一抗的信號。二抗是利用抗體是大分子的蛋白質具有抗原性的性質，去免疫異種動物，由異種動物的免疫系統產生的針對於此抗體的免疫球蛋白。用抗AIV H5亞型血凝素單克隆抗體為包被抗體,兔抗AIV IgG為第二抗體。
區別
第一抗體就是平常所說的抗體，即能和抗原特異性結合。第二抗體是能和抗體結合的，即抗體的抗體。主要用於檢測抗體的存在。一抗是針對抗原的抗體，二抗是針對一抗的抗體。即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。也就是說，抗原進入機體刺激機體免疫系統產生免疫應答，由B細胞可以產生與相應抗原發生特異性結合的特殊蛋白質。一抗二抗都是一種可以特異結合別的物質的基團，而且一抗可以至少結合兩種其他基團(底物和二抗)。一抗:可以特異結合底物，就是識別出我們想要檢測的東西。一抗和底物結合與否用肉眼是看不出來的。二抗:可以和一抗結合，並帶有可以被檢測出的標記(如帶熒光、放射性、化學發光或顯色基團)，作用是檢測一抗。 如果一抗自己帶有可以被檢測出的標記(如帶熒光、放射性、化學發光或顯色基團)，則不需要二抗。但這樣成本很高，因為一種一抗只識別一種底物。所以如今的設計一般是二抗帶上可檢測標記，再來檢測一抗。而一抗識別底物。這樣，當一抗結合到底物上，就可以通過二抗檢測出來。
舉例
利用抗原-抗體反應原理，就是以一抗作為探針，它與目的蛋白作用並連接，再用帶有熒光(或同位素)標記的二抗與一抗作用，最後顯色，發光位置就有目的蛋白。
定義
- 指抗原與相應抗體之間所發生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內進行，也可以在機體外進行。抗原抗體反應的過程是經過一系列的化學和物理變化，包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉為疏水膠體的變化。
- HBsAg(表面抗原)
- HBsAb(表面抗體)
- HBeAg(E抗原)
- HBeAb(E抗體)
- (核心抗體)
- 最多見的是"三抗"陽性:"抗-HBs+、抗-HBe、和抗- HBc+"，這說明乙肝病毒感染結束，體內病毒清除，提示這個人免疫功能十分正常，可以獻血，也可以應用他的血製造高效價乙肝免疫球蛋門(HBIG)，用於對乙肝的防治。
- 二抗陽性"即"抗-HBs+和抗-HBe+"或"抗-HBs+和抗-HBc+"
製備方法
原理
ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由於抗原、抗體的反應在一種固相載體--聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育後，可通過洗滌除去多餘的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用於檢測抗體的間接法(圖a)、用於檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用於檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
操作步驟
- 方法一 用於檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
- 包被:用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩衝液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩衝液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
- 5%脫脂乳(SMP)或者BSA 37℃(或者RT封閉)封閉1小時。棄去孔內溶液，用洗滌緩衝液洗3次，每次3分鐘。
- 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然後洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
- 加酶標抗體:於各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定後的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時，洗滌。
- 加底物液顯色:於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml，37℃10~30分鐘。
- 終止反應:於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
- 結果判定:可於白色背景上，直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以"+"、"-"號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上，於450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零後測各孔O·D值，若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。[2]
- 方法二 用於檢測未知抗體的間接法:
- 用包被緩衝液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml， 每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
- 加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml於上述已包被之反應孔 中,置37℃孵育1小時,洗滌。
- 同時做空白、陰性及陽性孔對照於反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml， 37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最後一遍用DDW洗滌。[3]
注意事項
- 1. 正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可採用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
- 2. 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
- (1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
- (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多採用4℃18~24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被後，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對於多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
- (3)酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然後再固定其它條件或採取"方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
- (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是當前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間後，應加入強酸或強鹼以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配製，尤其是H2O2在臨用前加入。[4]
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藥學二抗微生物