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细胞培养基
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{| class="wikitable" style="float:right; margin: -10px 0px 10px 20px; text-align:left"
|<center>'''细胞培养基'''<br><img src="https:xxxxx//img2.baidu.jpgcom/it/u=1818770403,1306270757&fm=253&fmt=auto&app=138&f=JPEG?w=750&h=500" width="280"></center><small>[https://www.casmart.com.....html cn/product-details/page/1601/52627408 圖片來 自OOO自武汉捷诚宇恒科技有限公司]</small> |}'''细胞培养基'''既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养 [[ 细胞生长 ]] 和繁殖的生存环境。
==基本介绍==
=== [[ 动物细胞培养 ]] 必需的溶液===
平衡盐水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基础溶液。PH调整液:
3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羟乙基哌嗪乙烷磺酸)
细胞 [[ 消化液]]: [[ 胰蛋白酶 ]] 溶液、EDTA溶液、 [[ 胶原酶溶液 ]] 。
===抗生素溶液:===
1)青、链霉素,每毫升 [[ 培养液 ]] 含100U [[ 青霉素 ]] 和100ug链霉素。
2) [[ 卡那霉素 ]] :终浓度为50ug/ml培养液。
3) [[ 制霉菌素 ]] :浓度25U/ml,小瓶分装,每瓶一次用完。
常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清,前者来源少,价格高;后者要求刚产下尚未哺乳的小牛,因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有 [[ 蛋白质 ]] 、 [[ 氨基酸 ]] 、 [[ 葡萄糖 ]] 、激素等。蛋白质主要是 [[ 白蛋白 ]] 和 [[ 球蛋白 ]] 。
氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分,氨基酸中有12种是细胞本身不合成的,必须由培养液提供。激素有胰岛素、生长激素和多种生长因子如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子(MSA)、类胰岛素生长因子(IGFl、IGF2)等。
水解乳蛋白、胶原是另外两种较好的天然培养基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物,呈蛋黄色粉末状,富含氨基酸。一般配制成0.5%溶液,微酸性。胶原是从动物真皮中提取的,具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。
=== [[ 合成培养基]]===1951年厄尔开发了供 [[ 动物细胞 ]] 体外生长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基的种类相当多。合成培养基成分已知,便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比,有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代,因此,细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分,以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。
动物血清成分复杂,各种生物大小 [[ 分子混合 ]] 在一起,有些成分至今尚未搞清楚。血清对 [[ 细胞生长 ]] 很有效,但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限,成本高,限制了它的大量使用。 无血清培养基不加动物血清,在基础培养基中加入细胞生长 [[ 有效因子 ]] , [[ 激素 ]] 等。
==组成及作用==
===氨基酸===
组成蛋白质的 [[ 基本单位 ]] 。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。
必需氨基酸包括L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸等。
维持细胞生长的生物活性物质,在细胞代谢中起调节及控制作用。在细胞培养中,尽管血清是维生素重要来源,但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。
许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分,没有它们,酶便没有活性,代谢活动将无法进行。
===冰点渗透压===
细胞必须生活在合适的渗透压环境中;同时渗透压值的测定也可以检查培养基的批间差异。
=== [[ 菌落总数]]===粉末培养基不是 [[ 无菌制剂 ]] ,培养基本身的营养成分很丰富,容易滋生微生物,因此 [[ 菌落 ]] 的控制可以延长有效期
===细胞生长试验===
可检查细胞培养基是否有促生长的能力,以及是否有不利细胞生长的毒素。
=== [[ 细菌内毒素]]===
为满足生物制品细菌内毒素的控制要求,作为生物制品生产原料的培养基同样需要细菌内毒素控制。
===稳定性===
确定产品的储存、 [[ 运输条件 ]] ,产品的保质期限。
===一致性===
验证产品的 [[ 均一性 ]] 。
==参考文献==