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重组质粒
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| style="background: #008080" align= center| '''<big> 茄青椒重组质粒</big> '''
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[[File:20235200911210964.jpg|缩略图|居中|[httpshttp://i8ylewww.bio-equip.com/p800 imgatl/200911210964.jpg 原图链接][http://pic.sogsogou.com/d?query=%E9%87%8D%E7%BB%84%E8%B4%A8%E7%B2%92&forbidqc=&entityid=&preQuery=&rawQuery=&queryList=&st=&did=1 来自 搜狗 的图片]]]
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有目的基因， [[ 有质粒 ]] ，然后用酶使两者相接就是 [[ 重组质粒 ]] ，重组质粒是一个种动作，方法，也是一个名词。=='''作品原文'''==
==''' 创作背景基本信息'''==
质粒具有稳定可靠和[[操作简便的优点]]。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子
==''' 作品鉴赏反应策略'''==
''' 整体赏析带有非互补突出端的片段'''
外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种：
'''带有相同的黏性末端''' 2、带有相同的黏性末端 用相同的酶或同尾酶处理可得到这样的末端。 由于质粒载体也必须用同一种酶消化，亦得到同样的两个相同粘性末端，因此在连接反应中外源片段和质粒载体DNA均可能发生自身环化或几个分子串连形成寡聚物, 而且正反两种连接方向都可能有。所以，必须仔细调整连接反应中两种DNA的浓度, 以便使正确的连接产物的数量达到最高水平。还可将载体DNA的5'磷酸基团用碱性磷酸酯酶去掉, 最大限度地抑制质粒DNA的自身环化。带5'端磷酸的外源DNA片段可以有效地与去磷酸化的载体相连, 产生一个带有两个缺口的开环分子,在转入大肠杆菌（E. coli）受体菌后的扩增过程中缺口可自动修复。 '''带有平末端''' 3、带有平末端 是由产生平末端的限制酶或核酸外切酶消化产生，或由DNA聚合酶补平所致。由于平端的连接效率比黏性末端要低得多，故在其连接反应中，T4 DNA连接酶的浓度和外源DNA及载体DNA浓度均要高得多。通常还需加入低浓度的聚乙二醇(PEG 8000)以促进DNA分子凝聚成聚集体的物质以提高转化效率。 '''特殊情况下''' 外源DNA分子的末端与所用的载体末端无法相互匹配,则可以在线状质粒载体末端或外源DNA片段末端接上合适的接头(linker)或衔接头(adapter)使其匹配, 也可以有控制的使用E. coli DNA聚合酶Ⅰ的klenow大片段部分填平3'凹端,使不相匹配的末端转变为互补末端或转为平末端后再进行连接。<ref>[https://newnews.A027ALsina.html com.cn/o/2006-01-04/03537886978s.shtml 它常 “ 叶里藏珠 表达凝血八因子新的重组质粒 ”成功研制], 腾讯新浪网2006年1月4日, </ref>
==参考文献==
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