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查士丁尼一世（拉丁語：Justinianus I；希臘語：Ιουστινιανός；全名為弗拉維·伯多祿·塞巴提烏斯·查士丁尼 Flavius Petrus Sabbatius Justinianus，約483年5月11日－565年11月14日）是東羅馬帝國皇帝，他的統治時間是從527年到565年。由於他收復了許多失土，重建聖索菲亞教堂，並編纂查士丁尼法典，功不可沒，因此也被稱為查士丁尼大帝。

查士丁尼一世是古羅馬時代末期最重要的一位統治者，他的統治期一般被看作是羅馬帝國歷史從古典時期邁向中古世紀的的重要過渡期。比如他於542年廢除了執政官這個從羅馬共和國遺留下來的官職（可能出於費用的考慮）。他還加強了皇帝作為神在地上的代表的地位，這一舉動徹底破壞了羅馬帝國中皇帝被視為執行長、「國家之父」，「第一公民」的形象。但歷史學家普羅科匹厄斯就已經對查士丁尼一世的政策提出了深刻的批評。普羅科匹厄斯的著作是今天對查士丁尼一世統治期研究最重要的一手資料。