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心肌细胞又称心肌纤维,有横纹,受植物性神经支配,属于有横纹的不随意肌,具有兴奋收缩的能力。呈短圆柱形,有分支,其细胞核位于细胞中央,一般只有一个。各心肌纤维分支的末端可相互连接构成肌纤维网。广义的心肌细胞包括组成窦房结、房内束、房室交界部、房室束(即希斯束)和浦肯野纤维等的特殊分化了的心肌细胞,以及一般的心房肌和心室肌工作细胞。[1]

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分类

根据它们的组织学特点、电生理特性以及功能上的区别,可以粗略地分为两大类型,两类心肌细胞分别实现一定的职能,互相配合,完成心脏的整体活动

结构特征

1.心肌细胞为短柱状,一般只有一个细胞核,而骨骼肌纤维是多核细胞。心肌细胞之间有闰盘结构。该处细胞膜凹凸相嵌,并特殊分化形成桥粒,彼此紧密连接,但心肌细胞之间并无原生质的连续。心肌组织过去曾被误认为是合胞体,电子显微镜的研究发现心肌细胞间有明显的隔膜,从而得到纠正。心肌的闰盘有利于细胞间的兴奋传递。这一方面由于该处结构对电流的阻抗较低,兴奋波易于通过;另方面又因该处呈间隙连接,内有15~20埃的嗜水小管,可允许钙离子等离子通透转运。因此,正常的心房肌或心室肌细胞虽然彼此分开,但几乎同时兴奋而作同步收缩,大大提高了心肌收缩的效能,功能上体现了合胞体的特性,故常有“功能合胞体”之称。 2.心肌细胞的细胞核多位于细胞中部,形状似椭圆或似长方形,其长轴与肌原纤维的方向一致。肌原纤维绕核而行,核的两端富有肌浆,其中含有丰富的糖原颗粒和线粒体,以适应心肌持续性节律收缩活动的需要。从横断面来看,心肌细胞的直径比骨骼肌小,前者约为15微米,而后者则为100微米左右。从纵断面来看,心肌细胞的肌节长度也比骨骼肌的肌节为短。 3.在电子显微镜下观察,也可看到心肌细胞的肌原纤维、横小管、肌质网、线粒体、糖原、脂肪等超微结构。但是心肌细胞与骨骼肌有所不同;心肌细胞的肌原纤维粗细差别很大,介于0.2~2.3微米之间;同时,粗的肌原纤维与细的肌原纤维可相互移行,相邻者又彼此接近以致分界不清。心肌细胞的横小管位于Z线水平,多种哺乳动物均有纵轴向伸出,管径约0.2微米。而骨骼肌的横小管位于A-I带交界处,无纵轴向伸出,管径较大,约0.4微米。心肌细胞的肌质网丛状居中间,侧终池不多,与横小管不广泛相贴。

细胞培养

鼠心肌细胞的培养和分离 目的 建立心肌细胞培养模型,用于心肌细胞体外实验。 方法 采用胰酶消化及新生大鼠心肌细胞与非心肌细胞如成纤维细胞、血细胞等的差时贴壁法分离提纯心肌细胞,建立心肌培养模型。 结果 心肌细胞培养最长成活时间达3天,心肌细胞受消化时间的影响有不同的形态表现。 结论 可以利用差时贴壁法分离新生鼠心肌细胞并在体外进行培养,胰酶消化以低浓度短时间为佳。 材料 1.心肌细胞的消化 取一只加盖烧杯,内放一块用乙醚饱和的纱布,把0~3日龄的大鼠幼鼠放进该烧杯中麻醉,用2%碘酒和75%酒精消毒胸腹皮肤,在无菌条件下开胸取出心脏,立即置于4ºCD-Hanks液(mmol/L:Nacl137,Kcl5.4,Na2HPO40.37,K2HPO40.44,NaHCO34.2)中剪取心室肌,洗净残血,剪成约1mm³大小的组织块,弃去D-Hanks液加入0.08%胰蛋白酶液10~15ml,于37°C静置5min,吸出上层悬液,并加入等量的含血清培养基。经终止消化后离心(1800r/min)弃上清液,加入含血清的培养液。吹散沉淀细胞,同条件下离心,用10%血清培养液制成细胞悬液,置于37°C含5%CO2培养箱中。 心肌细胞分离 根据心肌细胞和非心肌细胞贴壁时间的不同采用2小时差速贴壁,分别获得心肌成纤维细胞和心肌细胞。心肌细胞按1*106个细胞/ml种于50ml培养液中,培养的前2天在心肌细胞培养液中加入5-溴脱氧嘧啶核苷0.1mmol/l,以抑制非心肌细胞增殖,所有培养的心肌细胞均每2天换液一次。 1.3心肌细胞的无血清培养 当心肌细胞培养24小时后换无血清培养液(含DMEM培养液,胰岛素10g/ml,铁蛋白10g/ml,维生素C100g/L维生素B121.5µmol/L)继续培养48小时,每隔8小时换液一次,尽量保持各添加成分浓度不变,最后收集细胞,进行测定。 2.实验结果 本次实验中新生大鼠心肌细胞培养最长存活时间为3天。实验采取低浓度,短时间胰蛋白酶消化的方法。消化时间不同,所得到的细胞有不同的形态变化:消化3~5分钟,高倍镜下观察心肌细胞大部分呈新月形,并可见细胞在培养液中呈头尾相连的过程,呈动态变化。而消化5~10分钟的心肌细胞卷曲呈圆形,密度低,活动能力差。细胞培养约8小时后向一处聚集,彼此钩连呈现高密度区,这可能与细胞之间形成连接有关。由于某种不明原因,多次培养过程中心肌细胞中都出现不明微生物,致使细胞在3天后基本死亡。 3.实验讨论 有很多文献报道新生大鼠心肌细胞的培养时间为10~12天,本次实验的培养时间为3天,与之比较成活时间较短,但本实验可以说明低浓度胰蛋白酶消化液(0.08%)比一般浓度(0.125%)的消化时间效果好,消化时间在3~5分钟内可减少细胞死亡率.实验过程中出现的细胞向一处聚集的现象和可见的连续的形态变化,可以说明体外培养心肌细胞重新连接成更大单位细胞团是可能的,它们可能通过形态的变化相互钩连,连接成网。

参考文献