放射免疫分析

放射免疫分析（英語：radioimmunoassay，縮寫為RIA），又稱為放射免疫分析法、放射免疫測定或放射免疫測定法，簡稱放免或放免法，是一種在無須採用生物測定方法的情況下，用於檢測抗原（例如血清之中激素的水平）的實驗室測定方法。這一方法是由羅莎琳·薩斯曼·耶洛和Solomon Aaron Berson於1950年代創建的。耶洛因建立胰島素的RIA檢測方法而獲1977年諾貝爾生理學或醫學獎：對此類微量激素的精確測定在當時的內分泌學領域被認為是一項突破^[1]。

基本原理

RIA的基本原理為：放射性同位素標記的抗原（簡稱「標記抗原」）和非標記抗原（標準抗原或待測抗原）同時與數量有限的特異性抗體之間發生競爭性結合（抗原－抗體反應）。由於標記抗原與待測抗原的免疫活性完全相同，對特異性抗體具有同樣的親和力，當標記抗原和抗體為數量恆定時，待測抗原和標記抗原的總量大於抗體上的有效結合點時，標記抗原-抗體複合物的形成將隨着待測抗原量的增加而減少，而非結合的或游離的標記抗原則隨着待測抗原數量的增加而增加（也就是所謂的競爭結合反應），因此測定標記抗原-抗體或標記抗原即可推出待測抗原的數量。

抗原的放射性標記常常是利用碘發射γ射線的放射性同位素與酪氨酸結合來實現的。病人血清等標本之中所含的是未經放射性標記的抗原（亦可稱為「冷」抗原），即待測抗原。總體上來說，特異性抗體之上抗原結合部位的數量是有限的。相對有限的抗原結合部位而言，標記抗原與待測抗原之間屬於競爭關係。通過繪製結合曲線，即可計算出病人血清之中待測抗原的確切數量。

在採用這種方法的時候，結合抗原與非結合抗原之間的分離至關重要。最初，為了沉澱和離心抗原－抗體反應所形成的免疫複合物^[2]，分離方法採用的是針對第一抗體的第二抗體。後來，在對T3和T4進行RIA測定時，哥倫比亞大學的Werner和Acebedo對RIA方法進行了擴展，採用活性炭懸濁液進行沉澱。1975年，Acebedo和Hayek等人在BBRC之上發表了人TSH的超微量RIA法。

優缺點

RIA技術極其敏感而又極其特異，但自動化機台的取得卻較受限，且成本也不低。同時，RIA還需要特殊的預防措施，因為其要用到放射性物質。因此，如今RIA在很大程度上已經被ELISA所取代。就ELISA而言，抗原－抗體反應的測定採用的是顏色變化信號，而不是放射性信號。

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