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| 抗凝剂 | |
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抗凝剂，应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。 如天然抗凝剂(肝素，水蛭素等) Ca2+螯合剂(柠檬酸钠，氟化钾)[1]
基本信息
抗凝剂
医疗用途:治疗静脉炎，阻止血块在静脉里形成。
体育用途:避免促红细胞生成素使血液变稠。[2]
应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。
如天然抗凝剂(肝素，水蛭素等)
Ca鳌合剂(柠檬酸钠，氟化钾)
原理:使凝血酶原不能激活，Ca是凝血因子IV，其他的是蛋白类。
种类
乙二胺四乙酸
乙二胺四乙酸(EDTA)盐 EDTA有二钠、二钾和三钾盐。均可与钙离子结合成螯合物，从而阻止血液凝固。
EDTA盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会(International committee standard of hematology ,ICSH)1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂，用量为EDTA-K2。2H2O1.5-2.2MG (4.45±0.85μmol)/ml血液。EDTA-NA与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果，其他抗凝剂不适合于血细胞计数。表1-1是几种抗凝剂对白细胞计数的影响，EDTA影响小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。
草酸钠(sodium oxalate)草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。
肝素(heparin)肝素广泛在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖，是分散物质，平均分子量为15000(2000-40000)。肝素可加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成，对抗凝血酶和阻止血小板聚集等多种作用。每毫升血液抗凝需要持素15±2.5IU 。尽管肝素可以保持红细胞的自然形态，但由于其常可引起白细胞聚集关使用涂片在罗氏()染色时产生蓝色背景，因此肝素抗凝血不适全血液学一般检查。肝素是红细胞透渗脆性试验理想的抗凝剂。
枸橼酸钠(trisodium citrate)枸橼酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。
枸橼酸钠有2Na3C6H5O7。和2Na3C6H5。11H2O等多种晶体。通常用前者配成109mmol/l(32g/l)水溶液(也有用106mmol/l浓度)，与血液按1:9或1:4比例使用。枸椽钠对凝血V因子有较好的保护作用，使其活性减低缓，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定。因毒性小，是输积压保养中的成分之一。[1]
临床应用
EDTA
EDTA是临检工作中最常用和最重要的抗凝剂和试剂之一，其机制是通过与水相中的钙离子形成稳定的螯合物而阻止血液凝固。EDTA的盐类有钾、钠、锂盐、均溶于水，钾盐较钠盐的溶解度大，全血胞计数最好使用EDTA的钾盐。EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适于制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。EDTA还会影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，也不适于做止血学检验和血小板功能检验。用EDTA抗凝血制备的涂片对粒细胞形态有影响，其影响程度与抗凝血放置时间和抗凝剂浓度有关。按照ICSH建议EDTA的使用浓度为1.4~1.6g/L血液，迅速制备涂片，粒细胞形态特征有微小的改变，有时细胞核分叶不见，细胞肿胀。如果用放置时间较长的血液制备的涂片可出现细胞浆内颗粒消失，胞浆和细胞核有空泡，染色质模糊不清。用大于1.5g/L血液浓度制备的血涂片，粒细胞可完全变性，对淋巴细胞和单核细胞也有影响，尤其是血小板，可出现肿胀、破裂而产生碎片，影响其计数，造成结果偏高。获得血浆标本可通过不同的抗凝剂，肝素锂作为抗凝剂在国外应用广泛，而国内多使用肝素钠、EDTA-K2抗凝，与国外有所不同。随着临床医学的发展，近年来糖化血红蛋白检测项目的开展，也使用了EDTA-K2作为抗凝剂，从而减少了对结果的影响。
肝素
肝素是血液化学成分测定中最好的抗凝剂。肝素是一种含硫酸基团的黏多糖，分子量为1.5万，其抗凝机制是与抗凝酶Ⅱ一起，在低浓度能抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，并能加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成;还有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。肝素的盐类有钠、锂、铵盐。通常用肝素抗凝的剂量是10.0~12.5IU/mL血液。临床常用肝素锂，虽其价格较贵，但抗凝效果较好。因为肝素钠能增加血浆钠的含量，而肝素铵能增加尿素氨的含量。某些生化成分在血清和肝素抗凝的血浆中有明显的区别。在凝血过程中由于红细胞的溶解破坏使血清钾的含量比血浆为高，由于血浆中含有Fg，其含量比血清高。因此，测定钾离子时，注意血清与血浆之间的差异。另外肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适于白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血学检验。通过试验表明，采血时加入肝素钠抗凝剂后，对测定血液中总蛋白质含量结果有较明显的影响，会使其测得结果高于用血清测得总蛋白质3%~5%。但加入了抗凝剂后，其总蛋白含量低于血清总蛋白质含量，其原因是血液加入肝素钠抗凝剂后，阻断了凝血活酶的生成，阻止了血液凝固，导致纤维蛋白原不能水解转化成纤维蛋白单体，有效阻止了纤维蛋白单体的形成，这些纤维蛋白原仍留在血浆中。而血清是血液经凝固后，纤维蛋白原水解转化为纤维蛋白单体，并因凝固而消耗，离心后随血细胞一并分离出去了。因此，血浆中的总蛋白质量是包含了纤维蛋白原在内的所有蛋白质，而血清中是不含有纤维蛋白原的总蛋白质含量，理论上应该低于血浆中的总蛋白含量。因此在进行血液总蛋白质含量测定时，最好以血清为标本，对一些急诊标本，或是一些因其他原因急需测定的患者，需要用血浆做标本测定总蛋白时，在测出总蛋白后，应扣除纤维蛋白原的含量(一般扣除3%~5%)，这样才能与以血清为标本测得的总蛋白含量一致，真实反映患者体内实际总蛋白质之含量。
枸橼酸盐
枸橼酸盐主要用于止血学检验及血沉的测定。因其毒性小，也用于输血保养液中。其抗凝机制是枸椽酸盐与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固，其反应式为Na3C6H5O7+Ca2+→CaC6H5+3Na+。其盐类主要是钠盐。枸缘酸钠有Na3C6H5O7ZH?5O和2Na3C6H5O7+1H2O2种晶体，通常用前者配制0.129 mol/L(3.8%)或0.109mol/L(3.2%)的血溶液，与血液按1:9使用。对于用于监测口服华法令等抗凝剂治疗的患者，测定PT、APTT所用的枸缘酸钠浓度(3.2%或3.8%)不应随意改变，因为可能影响到国际标准化比值(INR)。一般用浓度0.129mol/L的枸缘酸钠比用0.109mol/L浓度时INP值要高些，另外对不同来源的凝血活酶试剂，对同一正常人或患者血浆的凝固时间可以相差很大。因此每个实验室所使用的凝血活酶试剂的来源应尽可能恒定，配制操作方法应规范化，否则会使凝固时间延长或缩短，或使正常值无规律性。有条件的实验室可采用缓冲抗凝剂，这种试剂对标本经冷冻保存后再进行分析更为适宜。缓冲剂的作用是维持血浆恒定pH值，防止易变因子失活。[2]
配制
EDTA
常用EDTA的钠盐或钾盐作为抗凝剂，能与血液中的钙离子结合成螯合物，而使钙离子失去凝血作用，从而阻止血液凝固。
肝素
1%肝素溶液0.1ml于试管内，旋转试管，使溶液均匀浸湿试管内壁，放入80~100℃烘箱烤干，每管能使5~10ml血液不凝。急性血压实验时可在充满生理盐水的动脉套管内注入肝素20~25mg。体内抗凝:500~1000u/kg。 市售的肝素注射液每1ml含肝素12500u(相当于肝素钠125mg，即1mg相当于100u)。应置冰箱内保存。
枸橼酸钠
枸橼酸钠 3.8%的枸橼酸钠溶液1份可使9份血液不凝，用于红细胞沉降速率的测定。因其抗凝血作用较弱而碱性较强，不适用于供化验用的血液样品。做急性血压实验时则用5~7%的枸橼酸钠溶液。
草酸钾
草酸钾常用于供检验用血液样品的抗凝。在试管内加饱和草酸钾溶液2滴(或10%溶液0.2ml)，轻轻敲击试管，使溶液分散到管壁四周，置80℃以下的烘箱中烤干(烘烤温度过高，可使草酸钾分解为碳酸钾而失效)，每管能使3~5ml血液不凝。供钾、钙含量测定的血样不能用草酸钾抗凝。
关于保存:新鲜冰冻血浆在-20℃以下可保存1年
原理
不同的抗凝剂其抗凝原理略有不同。
乙二胺四乙酸(EDTA)与枸橼酸盐的抗凝原理相同:是与血液中Ca离子结合成螯合物，使Ca失去活性，中断凝血过程，从而达到抗凝的目的。
肝素是通过加强抗凝血酶Ⅲ，灭活丝氨酸蛋白酶，阻止凝血酶的形成来达到抗凝的目的。
草酸盐是通过其草酸根与血液中的Ca离子形成草酸钙沉淀，使其无凝血功能。