1601年至1602年第一次旅居梵蒂冈期间为位于罗马的耶路撒冷圣十字圣殿绘制了3幅祭坛画 （现存格拉斯的医院）。

1603年公爵派遣鲁本斯出使西班牙，期间完成名作《莱尔马公爵骑马像》 ，现存普拉多博物馆<ref>[https://www.museodelprado.es/coleccion/obra-de-arte/retrato-ecuestre-del-duque-de-lerma/323c6f0b-8a88-4241-9499-d4e389d0de64 《莱尔马公爵骑马像》资料（西班牙语）普拉多博物馆[引用日期2012-11-18] ]</ref>

1605年底鲁本斯再访罗马，计划在此停留3年。他被委托为罗马的新堂（又名小谷圣母教堂）的主祭坛创作祭坛画，这对于外邦人是极高的荣誉。在其第一稿中容纳了[[圣母、圣子、圣额我略]]以及诸位圣人，然而细致的人物刻画因为教堂不佳的采光而失去了光彩，画家又以3幅石板绘画代替，原稿现存法国[[格勒诺布尔]]的博物馆。