3,297
次編輯
變更
ABC法
,创建页面，内容为“[[File:ABC法.jpg|缩略图|[https://pic.sogou.com/d?query=ABC法&forbidqc=&entityid=&preQuery=&rawQuery=&queryList=&st=&did=1 原图链接][https://www.sohu.com/a/3…”
[[File:ABC法.jpg|缩略图|[https://pic.sogou.com/d?query=ABC法&forbidqc=&entityid=&preQuery=&rawQuery=&queryList=&st=&did=1 原图链接][https://www.sohu.com/a/347320464_120136537 来自搜狐]]]
'''ABC法'''是ABC免疫酶染色法的简称，又称卵白素-生物素-酶复合物染色法，是最敏感的免疫组织化学染色法之一。其基本原理是将特异性一抗与组织细胞相应抗原结合后，通过生物素化二抗与一抗结合，借助卵白素与生物素的天然亲和性将卵白素化辣根过氧化物酶链接为复合物，通过酶促反应，显示组织细胞相应的抗原。
== 染色步骤 ==
染色的基本步骤：
1：细胞准备。将7mm x 22mm盖片置于培养瓶中，加入对数生长期细胞悬液于培养瓶中，待细胞长成单层，取出盖片，用PBS洗2次；悬浮生长的细胞离心后用PBS离心洗涤2次，制成细胞涂片。
2：细胞固定。用醋酸/甲醇或95%酒精固定20-30min。
3：取已固定的细胞盖片，用PBS洗5min，浸入37℃的0.75%H2O2-PBS中3min，以阻断[[内源性过氧化物酶]]。
4：PBS振洗2次，每次3min。
5：滴加正常马血清，在湿盒内，37℃保温30min，以消除非特异性染色。
6：弃去正常马血清，滴加小鼠特异性抗体，在湿盒呢37℃保温30-60min或4℃过夜。
7：PBS振洗2次，每次3min。滴加生物素化马抗小鼠IgG,在湿盒内37℃ 30min。
8：PBS振洗3次，每次3min，滴加ABC试剂，在在湿盒内37℃ 30min.
9：PBS振洗2次，THB振洗1次，每次3min，浸入新鲜配制的底物溶液，在室温下置暗处10-20min。
10：自来水洗5min
11：细胞核染色。浸入苏木精染液染色2min，自来水洗，迅速过盐酸酒精溶液，自来水洗，过氨水溶液，自来水洗。
12：逐级脱水。过70%酒精1次，95%酒精2次，无水乙醇3次，每次1min。
13：透明，过二甲苯溶液3次，每次1min。
14：将有细胞的面向下，用[[中性树脂]]封片。
此种染色方法应设置阳性对照、阴性对照、空白对照及抑制试验，以排除非特异性染色。要控制显色反应时间，以阳性反应着色最强，而有的是刚开始着色为佳。滴加抗体的量要适当，防止液体干涸。空白对照用PBS做一抗。抑制试验是将待检标本与未标记特异性抗体反应后，再用自己标记的特异性抗体进行染色，结果阳性强度减弱或转为阴性。<ref>[https://zhuanlan.zhihu.com/p/353360159 科普丨法考ABC证到底有什么区别？]知乎</ref>
此法染色结果在光镜下观察，阳性部分呈[[棕褐色]]。
== 主要材料 ==
使用的主要材料：PBS；T-ris-HCl缓冲液；底物溶液；ABC试剂盒；小鼠（兔）特异性抗体；盖片染色缸。湿盒，[[显微镜]]等。<ref>[https://wenwen.sogou.com/z/q470108391.htm 什么是ABC分析法？ABC分析法如何使用？ - ]搜狗问问</ref>
==参考文献==
{{reflist}}
[[Category:465 染料；顏料；塗料]]
'''ABC法'''是ABC免疫酶染色法的简称，又称卵白素-生物素-酶复合物染色法，是最敏感的免疫组织化学染色法之一。其基本原理是将特异性一抗与组织细胞相应抗原结合后，通过生物素化二抗与一抗结合，借助卵白素与生物素的天然亲和性将卵白素化辣根过氧化物酶链接为复合物，通过酶促反应，显示组织细胞相应的抗原。
== 染色步骤 ==
染色的基本步骤：
1：细胞准备。将7mm x 22mm盖片置于培养瓶中，加入对数生长期细胞悬液于培养瓶中，待细胞长成单层，取出盖片，用PBS洗2次；悬浮生长的细胞离心后用PBS离心洗涤2次，制成细胞涂片。
2：细胞固定。用醋酸/甲醇或95%酒精固定20-30min。
3：取已固定的细胞盖片，用PBS洗5min，浸入37℃的0.75%H2O2-PBS中3min，以阻断[[内源性过氧化物酶]]。
4：PBS振洗2次，每次3min。
5：滴加正常马血清，在湿盒内，37℃保温30min，以消除非特异性染色。
6：弃去正常马血清，滴加小鼠特异性抗体，在湿盒呢37℃保温30-60min或4℃过夜。
7：PBS振洗2次，每次3min。滴加生物素化马抗小鼠IgG,在湿盒内37℃ 30min。
8：PBS振洗3次，每次3min，滴加ABC试剂，在在湿盒内37℃ 30min.
9：PBS振洗2次，THB振洗1次，每次3min，浸入新鲜配制的底物溶液，在室温下置暗处10-20min。
10：自来水洗5min
11：细胞核染色。浸入苏木精染液染色2min，自来水洗，迅速过盐酸酒精溶液，自来水洗，过氨水溶液，自来水洗。
12：逐级脱水。过70%酒精1次，95%酒精2次，无水乙醇3次，每次1min。
13：透明，过二甲苯溶液3次，每次1min。
14：将有细胞的面向下，用[[中性树脂]]封片。
此种染色方法应设置阳性对照、阴性对照、空白对照及抑制试验，以排除非特异性染色。要控制显色反应时间，以阳性反应着色最强，而有的是刚开始着色为佳。滴加抗体的量要适当，防止液体干涸。空白对照用PBS做一抗。抑制试验是将待检标本与未标记特异性抗体反应后，再用自己标记的特异性抗体进行染色，结果阳性强度减弱或转为阴性。<ref>[https://zhuanlan.zhihu.com/p/353360159 科普丨法考ABC证到底有什么区别？]知乎</ref>
此法染色结果在光镜下观察，阳性部分呈[[棕褐色]]。
== 主要材料 ==
使用的主要材料：PBS；T-ris-HCl缓冲液；底物溶液；ABC试剂盒；小鼠（兔）特异性抗体；盖片染色缸。湿盒，[[显微镜]]等。<ref>[https://wenwen.sogou.com/z/q470108391.htm 什么是ABC分析法？ABC分析法如何使用？ - ]搜狗问问</ref>
==参考文献==
{{reflist}}
[[Category:465 染料；顏料；塗料]]