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高氏1號培養基

高氏1號培養基

高氏一號培養基是用來培養和觀察放線菌形態特徵的合成培養基。如果加入適量的抗菌藥物,則可用來分離各种放線菌。

目錄

基本信息

中文名; 高氏1號培養基

可溶性澱粉; 2g

瓊脂; 2g

自來水; 100mL

pH; 7.2~7.4

製備

基本原理

此合成培養基的主要特點是含有多種化學成分已知的無機鹽,這些無機鹽可能相互作用而產生沉澱。因此,混合培養基成分時,一般是按配方的順序依次溶解各成分,甚至有時還需要將兩種或多種成分分別滅菌,使用時再按比例混合。

配方; KNO3 0.1g

K2HPO4 0.05g

MgSO4· 7H2O 0.05g

NaCl 0.05g

FeSO4· 7H2O 0.001g (母液)

滅菌 1.05kg/cm2,20min

配製時,先用少量冷水,將澱粉調成糊狀,倒入少於所需水量的沸水中,在火上加熱,邊攪拌邊依次逐一溶化其他成分,溶化後,補足水分到100ml,調pH,121℃滅菌20min。

高溫滅菌後,倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培養基中混勻,將培養基倒入平皿內約15ml/皿。

高氏1號: 可溶性澱粉(20g),KNO3(1g),K2HPO4(0.5g),MgSO4· 7H2O(0.5g),NaCl(0.5g),FeSO4· 7H2O(0.01g),瓊脂 20g,pH=7.4-7.6

操作器材

1、溶液與試劑 可溶性澱粉, NaCI , KNO3 , K2 HPO4 .3H2 O MgSO4 .7 H2 O , FeSO4 .7 H2 O, 瓊脂,1mol/LNaOH, 1mol/LHCI。 2、儀器與其他用具 試管,錐形瓶,燒杯,量筒,玻璃棒,培養基分裝器,天平,高壓蒸汽滅菌器,PH試紙,棉花,牛皮紙,麻繩,紗布等。

操作步驟

1、稱量和溶化 按配方先稱取可溶性澱粉,放入小燒杯中,並用少量冷水將澱粉調成糊狀,再加入少於所需水量的沸水中,繼續加熱,使可溶性澱粉完全溶化。然後再稱取其他各成分,並依次溶化,對微量成分FeSO4 .7 H2 O可先配成高濃度的貯備 液,按比例換算後再加入。待所有試劑完全溶解後,補充水分到所需的總體積。 配製固體培養基時,將稱好的瓊脂放入已溶的試劑中,在加熱融化,最後補充所損失的水分。

2、調pH 用試紙測培養基的原始PH,如果偏酸,用滴管向培養基中加入1mol/LNaOH,邊滴邊攪拌,並隨時用pH試紙測其pH,直至pH達7.6。反之,用1mol/LHCI進行調節。

3、分裝和加塞 將配製的培養基分裝入試管內,在試管口或錐形瓶口上塞上棉塞。

4、包紮 加塞後,將全部試管用麻繩捆好,再在棉塞外包一層牛皮紙,其外再用一根麻繩紮好。用記號筆註明培養基名稱、組別、配製日期。

5、 滅菌 將上述培養基以1210C,20min,0.103MPa高壓蒸汽滅菌。

6、擱置斜面 將滅菌的試管培養基冷卻至500C左右,將試管口端擱在玻璃棒上。斜面的斜度要適當,使斜面的長度約為管長 1/3。

7、無菌檢查 將滅菌培養基放入370C的培養箱中培養24~28h,以檢查滅菌是否徹底。

和改良的差別就在於有沒有FeSO4· 7H2O 高氏常常配完後變成褐色也是由於Fe2+氧化為Fe3+的關係,所以常常有人用螯合的FeSO4,防止氧化。

作用

1 篩選

2 培養放線菌[1]

參考文獻