甘露三糖
甘露三糖是一种糖类化合物，来源于熟地黄。甘露三糖是熟地黄中含量最高的寡糖成分。可通过水苏糖水解制备得到。[1]甘露三糖具有促进造血细胞的增殖、提高免疫力、降血糖、抗肿瘤等药理活性。
目录
背景及概述
地黄(RehmanniaglutinosaLibosch.)在我国药用历史悠久，是一味重要的滋阴补肾中药，一般以鲜地黄、生地黄和熟地黄三种形式入药。近年来的研究证明，寡糖是地黄的重要活性成分，具有增强造血功能、促进免疫、降低血糖、增进骨代谢、抗肿瘤等作用。地黄寡糖成分较多，其中已知的寡糖包括蔗糖、楝二糖、棉子糖、甘露三糖、水苏糖、毛蕊四糖和毛蕊糖，另外薄层层析还发现中性组分中含有8种未知糖的斑点。地黄炮制前后主要寡糖的量存在显著变化，生地中以水苏糖为主，熟地中以甘露三糖为主。
究竟是哪种地黄寡糖在起作用，或者说哪种寡糖在起主要作用尚不清楚。目前文献报道，地黄中甘露三糖的分离纯化方法有水提醇析法、水苏糖水解反应法、酶催化水解反应法。水提醇析法：加4倍水，沸水浸提6h，提取2次，将水提液进行70%醇析处理后水苏糖的含量大大降低，有利于甘露三糖的分离，为甘露三糖的精制提供了有效的工艺参数。
水苏糖水解反应法：先用鲜地黄制备得到水苏糖，在pH2.5、90℃和24h条件下，水苏糖水解成为甘露三糖，90.63%的水苏糖可以水解。水苏糖降解生成三糖的方式有两种：一是生成半乳糖和棉子糖，二是生成果糖和甘露三糖。酶催化水解反应法：使用β-D-呋喃糖苷酶水解水苏糖，得到白色粉末状的甘露三糖，酶催化水解反应具有专属性高，条件温和，但需严格控制pH条件、酶的纯度，否则无法得到纯度很高的单体。
综观上述，从地黄中直接分离制备甘露三糖单体难度大，存在制备繁琐、甘露三糖单体纯度低等问题。如何快速、高效从地黄药材中分离纯化得到甘露三糖单体成分是目前地黄研究热点。
甘露三糖是一种天然的功能性寡糖，可以强效增殖人体肠道内有益菌群(双歧杆菌和乳酸菌等)，具有良好的生理功能。
制备[2-3]
方法1：一种由鲜地黄制备高纯度甘露三糖的方法，由如下步骤组成：
(1)鲜地黄高温加工炮制：取采收后的鲜地黄25.0g，弃去霉烂部位，洗净后切片，切成厚度为3cm的切片，密闭加热至90℃保持6h；
(2)甘露三糖样液制备：按质量比为1：2的比例将步骤(1)得到的鲜地黄加工炮制品加入70℃的水中浸提0.5h，残渣按上述工艺继续浸提1次，合并浸提液，真空浓缩至60。Brix的糖液，即得到甘露三糖样液。
(3)醇沉得甘露三糖样液醇沉部分：按体积比为1：2的比例将乙醇加入甘露三糖样液，在温度80℃保温30min，自然降温静置24h，得甘露三糖样液醇沉部分；
(4)除杂脱色浓缩得甘露三糖样液：将步骤3所得到的醇沉甘露三糖样液用水稀释10倍，用0.5％的活性炭或大孔吸附树脂(上样液重量与树脂体积比例为450g/L)脱色，过滤后在60℃条件下浓缩样液至60。Brix；
(5)凝胶LH20柱色谱分离得到甘露三糖：将甘露三糖样液稀释到10。Brix，通过凝胶LH20柱色谱以25％的乙醇洗脱，以TLC检测合并含甘露三糖的馏分，浓缩或冷冻干燥得甘露三糖，浓缩干燥得甘露三糖1.1g，纯度98.5％，总收率4.4％。
方法2：一种用活性炭梯度洗脱从地黄提取甘露三糖单体的方法，包括如下步骤：
（1）称取地黄根，清洗干净，粉碎；
（2）用干净地黄根量的10倍量的水超声提取或水煎煮提取，每次1h，合并所得药液，滤过；
（3）滤液减压浓缩干燥，得干浸膏；
（4）活性炭做为色谱柱固定相，取活性炭用水拌匀，湿法装柱，所用柱内径为3.5cm，柱长40cm；
（5）称取浸膏，用重蒸水完全溶解后，在常压下在1-6ml/min的流速下上活性炭色谱柱，色谱柱中活性炭的重量为浸膏重量的1-12倍；
（6）待上样完毕，在3-8ml/min的流速下，先用重蒸水冲洗至无色，再用5%、10%、20%、15%乙醇梯度洗脱4倍-5倍量柱体积，收集15%乙醇流份；
（7）将15%乙醇洗脱溶液在压力-5.7MPa，温度-70℃减压冷冻干燥；或压力为−0.070MPa，温度30℃，减压低温加热干燥得甘露三糖单体产品。