四聚體
基本介紹
由於可溶性MHC單體分子與TCR的親和力很低，解離快，而多價分子可與一個特異性T細胞上的多個TCR結合，使其解離速度大大減慢。為此Altman等提出藉助生物素—親和素級聯反應放大原理構建MHC I類分子四聚體。
該方法通過基因工程技術把長度為15個氨基酸殘基的生物素酶底物肽(Bio A substrate peptide，BSP)加在MHCI類分子如HLA-A2重鏈的羧基端形成融合蛋白，在體外按一定比例與日微球蛋白及特異的抗原短肽共孵育，使其摺疊成正確的構象，成為pMHC複合物。
將生物素標記在底物肽的賴氨酸殘基上，使得一個標記熒光素的鏈親和素與四個生物素標記的pMHC複合物結合形成四聚體，MHC-抗原肽四聚體與抗原特異性CTL上的TCR結合後，即可以通過流式細胞儀定量檢出體內抗原特異性CTL，並能將其分選出以供體外培養擴增和功能分析之用。
作用
四聚體技術使抗原特異性CTI-活性檢測達到特異、高效和直接定量的程度，可應用於免疫學研究和檢測、特異性免疫治療以及疫苗療效監測等多個方面。
(1)作為臨床診斷工具，定量檢測外周血及組織中抗原特異性CTI，的比率，並進行表型及功能分析。
Altman等曾在大量無症狀AIDS患者體內檢測到抗原特異性CTI。，檢出率高達2%。Zerbini等應用四聚體技術及免疫組化方法首次在肝細胞肝癌患者腫瘤組織中檢測到肽特異性的CD8 CTL，為針對MAGE抗原的免疫治療在HCC中的應用提供了廣闊的前景。
在自身免疫性疾病中四聚體原位染色最早用於TCR轉基因小鼠。通過對抗原特異性CTL的定量檢測、表型及功能分析，為闡明病毒感染性疾病、腫瘤及自身免疫性疾病的發病機制奠定了基礎。
(2)用於過繼性腫瘤免疫治療：Mei-denbauer等將大量Melan-A肽特異性CTL(42．1%)，靜脈輸注給8例難治性惡性黑色素瘤患者，結果發現外周血單核細胞中抗原特異性CTL的比率由輸注的o．01%～0．07%升至輸注後的2%。而且這些細胞能在活體內存活數周，具有分泌INF-7功能，並優先聚集到腫瘤局部發揮作用。
(3)用於疫苗療效的監測：近年用抗原肽脈衝處理的擾作為疫苗免疫機體從而誘發有效的CTL反應成為研究熱點。可用同源肽構建的四聚體監測該疫苗的療效。
參考來源