親和
基本信息
簡介
親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。現在使用更多的是從鏈黴菌中提取的鏈親和素（strepavidin）。生物素（biotin）又稱維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的複合體。因此把親和素和生物素與ELIS偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。
生物素在人體內是不能單獨起作用的，它需要與其他酶、氨基酸脂肪衍生物等結合來綜合調控。生物素結合常數即表示了它與其他有機分子結合能力的大小。
類別
親合素主要包括卵白親合素、鏈親合素、卵黃親合素及類親合素等。後兩種因其特異性親合力低，研究不多，前兩種目前已深入研究並得到廣泛應用。
各類介紹
1．親和素（Avidin，A） 親合素又稱卵白蛋白或抗生物素，分子量為68000，pI 10～10.5；在pH9～13緩衝液中性質均穩定，耐熱並耐多種蛋白水解酶的作用。天然親合素為鹼性蛋白，由4個相同的亞單位構成4聚體；每個親合素亞單位通過其結構中的色氨酸殘基與生物素中的Ureido環（I環）結合。因此，1個親合素分子存在4個與生物素分子結合位點，其結合常數（Ka）高 達1015mol／L。
通常，親合素的活性單位是以親合素結合生物素的量來表示的，即以能結合1Pg生物素所需要的親合素量為1個親合素活性單位。一般1Pg親合素約含13～15個活性單位。
2．鏈霉親合素（Streptavidin，SA） 鏈霉親合素(SA)是與親合素(A)有類似生物學特性的一種蛋白質。是由Strept
omyces avidin菌在培養過程中分泌的一種蛋白質產物，SA也可通過基因工程手段生產。SA分子量為65000，由4條序列相同的肽鏈構成，每條SA肽鏈可以結合1個生物素分子。因此與A一樣，每個SA分子也具有4個可與生物素分子結合位點，其結合常數與A相同為1015mol／L。約為抗原抗體間ka（105～1011 mol/L)的1萬倍以上。
SA與A的ka雖然相同，但在實際應用中其檢測靈敏度明顯優於A，其原因是SA為 略偏酸性的蛋白。SA的每條肽鏈含159個氨基酸殘基，其中賴氨酸、精氨酸等鹼性氨基酸的含量比一般親合素少，反之含酸性氨基酸較多，其等點為6.0，較A（pI＝10）為低，同時在結構中SA不含任何糖基，而A含糖可高達10％。A的高pI及高含糖結構導致在聚苯乙烯板和硝酸纖維素膜上或與組織細胞DNA結合時，易產生一定程度的非特異性結合，造成較高的顯色背景，而SA較A在應用中明顯克服了這一缺點。
SA最高的活性可達18u,較A高（15u）；與A一樣，每個SA分子也具有4個可與生物素分子結合位點，故其效應相同。