亲和
基本信息
简介
亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链亲和素（strepavidin）。生物素（biotin）又称维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。
生物素在人体内是不能单独起作用的，它需要与其他酶、氨基酸脂肪衍生物等结合来综合调控。生物素结合常数即表示了它与其他有机分子结合能力的大小。
类别
亲合素主要包括卵白亲合素、链亲合素、卵黄亲合素及类亲合素等。后两种因其特异性亲合力低，研究不多，前两种目前已深入研究并得到广泛应用。
各类介绍
1．亲和素（Avidin，A） 亲合素又称卵白蛋白或抗生物素，分子量为68000，pI 10～10.5；在pH9～13缓冲液中性质均稳定，耐热并耐多种蛋白水解酶的作用。天然亲合素为碱性蛋白，由4个相同的亚单位构成4聚体；每个亲合素亚单位通过其结构中的色氨酸残基与生物素中的Ureido环（I环）结合。因此，1个亲合素分子存在4个与生物素分子结合位点，其结合常数（Ka）高 达1015mol／L。
通常，亲合素的活性单位是以亲合素结合生物素的量来表示的，即以能结合1Pg生物素所需要的亲合素量为1个亲合素活性单位。一般1Pg亲合素约含13～15个活性单位。
2．链霉亲合素（Streptavidin，SA） 链霉亲合素(SA)是与亲合素(A)有类似生物学特性的一种蛋白质。是由Strept
omyces avidin菌在培养过程中分泌的一种蛋白质产物，SA也可通过基因工程手段生产。SA分子量为65000，由4条序列相同的肽链构成，每条SA肽链可以结合1个生物素分子。因此与A一样，每个SA分子也具有4个可与生物素分子结合位点，其结合常数与A相同为1015mol／L。约为抗原抗体间ka（105～1011 mol/L)的1万倍以上。
SA与A的ka虽然相同，但在实际应用中其检测灵敏度明显优于A，其原因是SA为 略偏酸性的蛋白。SA的每条肽链含159个氨基酸残基，其中赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的含量比一般亲合素少，反之含酸性氨基酸较多，其等点为6.0，较A（pI＝10）为低，同时在结构中SA不含任何糖基，而A含糖可高达10％。A的高pI及高含糖结构导致在聚苯乙烯板和硝酸纤维素膜上或与组织细胞DNA结合时，易产生一定程度的非特异性结合，造成较高的显色背景，而SA较A在应用中明显克服了这一缺点。
SA最高的活性可达18u,较A高（15u）；与A一样，每个SA分子也具有4个可与生物素分子结合位点，故其效应相同。